Buku Lotsogolera Sayansi ya Chilimwe: Pamene Mafunde a Kutentha a 40°C Akumana ndi Mayeso a Mamolekyulu

Kutentha kwambiri kwapitirirabe m'madera ambiri ku China posachedwapa. Pa Julayi 24, bungwe la Shandong Provincial Meteorological Observatory linapereka chenjezo lachikasu lotentha kwambiri, lomwe linaneneratu kutentha "kofanana ndi sauna" kwa 35-37°C (111-133°F) ndi chinyezi cha 80% kwa masiku anayi otsatira m'madera akumidzi. Kutentha m'malo monga Turpan, Xinjiang, kukuyandikira 48°C (111-133°F). Wuhan ndi Xiaogan, ku Hubei, ali ndi chenjezo la lalanje, ndipo kutentha kumapitirira 37°C m'madera ena. Pa kutentha kwakukulu kumeneku, dziko lapansi laling'ono lomwe lili pansi pa ma pipettes likukumana ndi kusokonezeka kwachilendo—kukhazikika kwa ma nucleic acid, ntchito ya ma enzyme, ndi momwe zinthu zilili m'thupi zimasokonekera pang'onopang'ono ndi kutentha.

Kutulutsa asidi wa nyukiliya kwakhala mpikisano wotsutsana ndi nthawi. Kutentha kwakunja kukapitirira 40°C, ngakhale mpweya woziziritsa uli woyaka, kutentha kwa tebulo logwirira ntchito nthawi zambiri kumakhala pamwamba pa 28°C. Panthawiyi, zitsanzo za RNA zomwe zatsala pamalo otseguka zimawonongeka mofulumira kuposa kawiri kuposa nthawi ya masika ndi autumn. Potulutsa mikanda ya maginito, yankho la buffer limadzazidwa m'deralo chifukwa cha kusinthasintha kwachangu kwa solvent, ndipo makhiristo amasungunuka mosavuta. Makhiristo amenewa amayambitsa kusinthasintha kwakukulu pakugwira ntchito kwa nucleic acid. Kusinthasintha kwa organic solvents kumawonjezeka nthawi imodzi. Pa 30°C, kuchuluka kwa chloroform volatilization kumawonjezeka ndi 40% poyerekeza ndi 25°C. Pakugwira ntchito, ndikofunikira kuonetsetsa kuti liwiro la mphepo mu fume hood ndi 0.5m/s, ndikugwiritsa ntchito magolovesi a nitrile kuti musunge mphamvu yoteteza.

Kuyesa kwa PCR kumakumana ndi kusokonezeka kwakukulu kwa kutentha. Ma reagents monga Taq enzyme ndi reverse transcriptase amakhudzidwa kwambiri ndi kusinthasintha kwadzidzidzi kwa kutentha. Kuundana kwa makoma a chubu pambuyo pochotsa mufiriji ya -20°C kungayambitse kutayika kwa ntchito ya enzyme yoposa 15% ngati italowa mu reaction system. Mayankho a dNTP amathanso kuwonetsa kuwonongeka komwe kungawonekere patatha mphindi 5 zokha kutentha kwa chipinda (>30°C). Kugwira ntchito kwa chida kumalepheretsedwanso ndi kutentha kwakukulu. Pamene kutentha kwa malo ochitira labotale kuli >35°C ndipo kuchotsedwa kwa kutentha kwa chipangizo cha PCR sikukwanira (<50 cm kuchokera pakhoma), kusiyana kwa kutentha kwamkati kumatha kufika 0.8°C. Kupatuka kumeneku kungayambitse kutsika kwa mphamvu ya amplification m'mphepete mwa mbale ya 96-well ndi kupitirira 40%. Zosefera za fumbi ziyenera kutsukidwa nthawi zonse (kusonkhanitsa fumbi kumachepetsa mphamvu ya kutayika kwa kutentha ndi 50%), ndipo mpweya wozizira uyenera kupewedwa. Kuphatikiza apo, mukamachita mayeso a PCR usiku wonse, pewani kugwiritsa ntchito chida cha PCR ngati "firiji yokhazikika" yosungira zitsanzo. Kusunga pa 4°C kwa maola opitilira awiri kungayambitse kuzizira pambuyo poti chivindikiro chotenthetsera chatsekedwa, zomwe zimapangitsa kuti dongosolo la reaction lichepe komanso kuwononga ma module achitsulo a chipangizocho.

Poyang'anizana ndi machenjezo opitilira kutentha kwambiri, ma laboratories a molecular ayeneranso kulira alamu. Zitsanzo zamtengo wapatali za RNA ziyenera kusungidwa kumbuyo kwa firiji ya -80°C, ndipo mwayi wolowera umakhala wochepa nthawi yotentha kwambiri. Kutsegula chitseko cha firiji ya -20°C nthawi zoposa zisanu patsiku kudzawonjezera kusinthasintha kwa kutentha. Zipangizo zopangira kutentha kwambiri zimafuna malo osachepera 50 cm otaya kutentha mbali zonse ziwiri ndi kumbuyo. Kuphatikiza apo, tikukulimbikitsani kusintha nthawi yoyesera: 7:00-10:00 AM pa ntchito zomwe zimakhudzidwa ndi kutentha monga kuchotsa RNA ndi qPCR loading; 1:00-4:00 PM pa ntchito zosayesa monga kusanthula deta. Njirayi ingathandize kupewa kutentha kwambiri kuti kusokoneze njira zofunika kwambiri.

Kuyesa kwa mamolekyulu panthawi ya kutentha ndi mayeso a luso komanso kuleza mtima. Pansi pa dzuwa losalekeza la chilimwe, mwina ndi nthawi yoti muyike pansi pipette yanu ndikuwonjezera bokosi lina la ayezi ku zitsanzo zanu kuti chipangizocho chichotse kutentha kwina. Kulemekeza kusintha kwa kutentha kumeneku ndi khalidwe lamtengo wapatali kwambiri la labotale m'miyezi yotentha yachilimwe—pambuyo pake, kutentha kwa 40°C kwa chilimwe, ngakhale mamolekyulu amafunikira "dera lopangidwa la polar" lotetezedwa bwino.