Chitsogozo cha Sayansi ya Chilimwe: Pamene 40 ° C Heat Wave Ikumana ndi Zoyeserera za Mamolekyulu

Kutentha kwakukulu kwapitilira ku China posachedwa. Pa July 24, Shandong Provincial Meteorological Observatory inapereka chenjezo la kutentha kwakukulu kwachikasu, kuneneratu kutentha kwa "sauna" kwa 35-37 ° C (111-133 ° F) ndi 80% chinyezi kwa masiku anayi otsatira m'madera akumidzi. Kutentha m’malo ngati Turpan, Xinjiang, kukuyandikira 48°C (111-133°F). Wuhan ndi Xiaogan, Hubei, ali pansi pa chenjezo lalalanje, ndi kutentha kupitirira 37 ° C m'madera ena. Mu kutentha kotentha kumeneku, dziko losawoneka bwino lomwe lili pansi pa ma pipettes likukumana ndi zosokoneza zachilendo-kukhazikika kwa nucleic acids, ntchito ya ma enzyme, ndi mawonekedwe a thupi la reagents zonse zimasokonezedwa mwakachetechete ndi kutentha kwa kutentha.

Kutulutsa kwa nucleic acid kwakhala mpikisano wotsutsana ndi nthawi. Kutentha kwakunja kukapitilira 40 ° C, ngakhale mutayaka choziziritsa, kutentha kwa tebulo lopangira opaleshoni nthawi zambiri kumapitilira 28 ° C. Panthawi imeneyi, zitsanzo za RNA zomwe zatsala poyera zimanyozetsa kuwirikiza kawiri monga masika ndi autumn. Pochotsa mkanda wa maginito, yankho la buffer limakhala lodzaza kwanuko chifukwa chakuthamanga kwa zosungunulira, ndipo makhiristo amalowa mosavuta. Makhiristo awa apangitsa kusinthasintha kwakukulu pakugwira ntchito kwa nucleic acid. Kusakhazikika kwa zosungunulira za organic kumawonjezeka nthawi imodzi. Pa 30 ° C, kuchuluka kwa chloroform volatilization kumawonjezeka ndi 40% poyerekeza ndi 25 ° C. Panthawi yogwira ntchito, ndikofunikira kuwonetsetsa kuti liwiro la mphepo mu fume hood ndi 0.5m / s, ndikugwiritsa ntchito magolovesi a nitrile kuti asunge chitetezo.

Kuyesa kwa PCR kumakumana ndi kusokonezeka kwa kutentha kwambiri. Ma reagents monga Taq enzyme ndi reverse transcriptase amakhudzidwa kwambiri ndi kusinthasintha kwadzidzidzi kwa kutentha. Kukhazikika pamakoma a chubu pambuyo pochotsedwa mufiriji -20 ° C kungayambitse kutayika kwa 15% kwa enzyme ngati ilowa m'dongosolo. Mayankho a dNTP amathanso kuwonetsa kuwonongeka komwe kumawonekera pambuyo pa mphindi zisanu zokha za kutentha kwa chipinda (> 30 ° C). Kugwiritsa ntchito zida kumalepheretsanso kutentha kwambiri. Pamene kutentha kwa labotale kuli> 35 ° C ndipo chilolezo cha kutentha kwa chipangizo cha PCR sichikwanira (<50 cm kuchokera pakhoma), kusiyana kwa kutentha kwamkati kumatha kufika pa 0.8 ° C. Kupatuka kumeneku kungayambitse kukulitsa bwino m'mphepete mwa mbale ya 96-chitsime kutsika ndi 40%. Zosefera zafumbi ziyenera kutsukidwa nthawi zonse (kuchulukana kwa fumbi kumachepetsa kutentha kwa 50%), komanso kuwongolera mpweya wolunjika kuyenera kupewedwa. Kuphatikiza apo, poyesa PCR usiku wonse, pewani kugwiritsa ntchito chida cha PCR ngati "firiji yongosintha" kuti musunge zitsanzo. Kusungirako pa 4 ° C kwa maola opitilira 2 kungayambitse kupangika chivundikiro chotenthetsera chitsekeka, kusokoneza kachitidwe komanso kuwononga ma module achitsulo.

Poyang'anizana ndi machenjezo osalekeza a kutentha kwakukulu, ma laboratories a maselo ayeneranso kuchenjeza. Zitsanzo zamtengo wapatali za RNA ziyenera kusungidwa kuseri kwa -80 ° C mufiriji, ndi mwayi wokhala ndi nthawi yotentha kwambiri. Kutsegula chitseko cha -20 ° C mufiriji kupitilira kasanu patsiku kumakulitsa kusinthasintha kwa kutentha. Zida zopangira kutentha kwakukulu zimafuna osachepera 50 masentimita a malo otaya kutentha kumbali zonse ndi kumbuyo. Kuphatikiza apo, tikulimbikitsidwa kukonzanso nthawi yoyesera: 7:00-10:00 AM pamachitidwe osagwirizana ndi kutentha monga kutulutsa kwa RNA ndi kutsitsa kwa qPCR; 1:00-4:00 PM pa ntchito zosayesa monga kusanthula deta. Njirayi imatha kuteteza nsonga za kutentha kwambiri kuti zisokoneze njira zovuta.

Kuyesera kwa mamolekyu pa kutentha kwa kutentha ndi kuyesa kwa luso komanso kuleza mtima. Pansi pa dzuwa losasunthika lachilimwe, mwina ndi nthawi yoti muyike pipette yanu ndikuwonjezera bokosi la ayezi ku zitsanzo zanu kuti chidacho chiwononge kutentha kwambiri. Kulemekeza kusinthasintha kwa kutentha kumeneku ndiko khalidwe la labotale lamtengo wapatali kwambiri m’miyezi yotentha yachilimwe—pajatu m’nyengo yotentha ya 40°C m’chilimwe, ngakhale mamolekyu amafunikira “dera lochita kupanga” lotetezedwa bwino.